ფლუორესცენტული ფილტრი ფლუორესცენტული მიკროსკოპის აუცილებელი კომპონენტია. ტიპურ სისტემას აქვს სამი ძირითადი ფილტრი: აგზნების ფილტრი, ემისიის ფილტრი და დიქრონიკული სარკე. ისინი ჩვეულებრივ შეფუთულია კუბში ისე, რომ ჯგუფი ერთად ჩასმულია მიკროსკოპში.
როგორ მუშაობს ფლუორესცენტური ფილტრი?
აგზნების ფილტრი
აგზნების ფილტრები გადასცემს კონკრეტული ტალღის სიგრძის სინათლეს და ბლოკავს სხვა ტალღის სიგრძეებს. მათი გამოყენება შესაძლებელია სხვადასხვა ფერის წარმოებისთვის, ფილტრის რეგულირებით, რათა მხოლოდ ერთი ფერი გაიაროს. აგზნების ფილტრები ორი ძირითადი ტიპისაა - გრძელვადიანი ფილტრები და ზოლიანი ფილტრები. აღმგზნები, როგორც წესი, არის გამტარი ფილტრი, რომელიც გადის მხოლოდ ფლუოროფორის მიერ შთანთქმული ტალღის სიგრძეებს, რითაც ამცირებს ფლუორესცენციის სხვა წყაროების აგზნებას და ბლოკავს აგზნების შუქს ფლუორესცენციის ემისიის ზოლში. როგორც ნახატზე ცისფერი ხაზიდან ჩანს, BP არის 460-495, რაც ნიშნავს, რომ მას შეუძლია მხოლოდ 460-495 ნმ ფლუორესცენციის გავლა.
ის მოთავსებულია ფლუორესცენტული მიკროსკოპის განათების გზაზე და ფილტრავს სინათლის წყაროს ყველა ტალღის სიგრძეს, გარდა ფტორფორის აგზნების დიაპაზონისა. ფილტრის მინიმალური გადაცემა კარნახობს სურათების სიკაშკაშეს და ბრწყინვალებას. ნებისმიერი აგზნების ფილტრისთვის რეკომენდებულია მინიმუმ 40% ტრანსმისია, რომ ტრანსმისია იდეალური იყოს >85%. აგზნების ფილტრის გამტარუნარიანობა მთლიანად უნდა იყოს ფტორფორის აგზნების დიაპაზონში ისე, რომ ფილტრის ცენტრალური ტალღის სიგრძე (CWL) მაქსიმალურად ახლოს იყოს ფტორფორის აგზნების პიკური ტალღის სიგრძესთან. აგზნების ფილტრის ოპტიკური სიმკვრივე (OD) კარნახობს ფონის სურათის სიბნელეს; OD არის საზომი იმისა, თუ რამდენად კარგად ბლოკავს ფილტრი ტალღის სიგრძეებს გადაცემის დიაპაზონის ან გამტარუნარიანობის გარეთ. რეკომენდებულია მინიმალური OD 3.0, მაგრამ OD 6.0 ან მეტი იდეალურია.
ემისიის ფილტრი
ემისიის ფილტრები ემსახურება იმ მიზანს, რომ ნიმუშიდან სასურველი ფლუორესცენცია მიაღწიოს დეტექტორს. ისინი ბლოკავენ მოკლე ტალღის სიგრძეებს და აქვთ მაღალი გადაცემა უფრო გრძელი ტალღების სიგრძისთვის. ფილტრის ტიპი ასევე ასოცირდება რიცხვთან, მაგ. BA510IF ფიგურაში (ინტერფერენციული ბარიერის ფილტრი), ეს აღნიშვნა ეხება ტალღის სიგრძეს მისი მაქსიმალური გადაცემის 50%-ზე.
აგზნების ფილტრების იგივე რეკომენდაციები მოქმედებს ემისიის ფილტრებზე: მინიმალური გადაცემა, გამტარუნარიანობა, OD და CWL. ემისიის ფილტრი იდეალური CWL, მინიმალური გადაცემის და OD კომბინაციით უზრუნველყოფს ყველაზე ნათელ სურათებს, რაც შეიძლება ღრმა დაბლოკვით და უზრუნველყოფს ყველაზე სუსტი ემისიის სიგნალების აღმოჩენას.
დიქრონიკული სარკე
დიქრონიკული სარკე მოთავსებულია აგზნების ფილტრსა და ემისიის ფილტრს შორის 45° კუთხით და ასახავს აგზნების სიგნალს ფტორფორისკენ, ხოლო ემისიის სიგნალს დეტექტორისკენ გადასცემს. იდეალურ ორქრონიკულ ფილტრებსა და სხივების გამყოფებს აქვთ მკვეთრი გადასვლები მაქსიმალურ ასახვასა და მაქსიმალურ გადაცემას შორის, აღგზნების ფილტრის გამტარუნარიანობის >95% ასახვით და ემისიის ფილტრის გამტარუნარიანობის >90% გადაცემით. აირჩიეთ ფილტრი ფტორფორის გადაკვეთის ტალღის სიგრძის (λ) გათვალისწინებით, რათა მინიმუმამდე დაიყვანოთ მაწანწალა შუქი და მაქსიმალურად გაზარდოთ ფლუორესცენტური გამოსახულების სიგნალი-ხმაურის თანაფარდობა.
ამ ფიგურაში დიქრონიკული სარკე არის DM505, ასე დასახელდა, რადგან 505 ნანომეტრი არის ტალღის სიგრძე ამ სარკის მაქსიმალური გადაცემის 50%-ზე. ამ სარკის გადაცემის მრუდი აჩვენებს მაღალ გადაცემას 505 ნმ-ზე ზემოთ, გადაცემის მკვეთრ ვარდნას მარცხნივ 505 ნანომეტრზე და მაქსიმალურ არეკვლას მარცხნივ 505 ნანომეტრზე, მაგრამ მაინც შეიძლება ჰქონდეს გადაცემა 505 ნმ-ზე ქვემოთ.
რა განსხვავებაა გრძელი და ზოლიანი ფილტრებს შორის?
ფლუორესცენტური ფილტრები შეიძლება დაიყოს ორ ტიპად: გრძელი უღელტეხილი (LP) და ზოლიანი ფილტრი (BP).
გრძელგამტარი ფილტრები გადასცემენ გრძელ ტალღას და ბლოკავს უფრო მოკლეს. ჩართვის ტალღის სიგრძე არის მნიშვნელობა პიკის გადაცემის 50%-ზე, ხოლო ტალღის სიგრძის ყველა სიგრძე გადადის გრძელგამტარი ფილტრებით. ისინი ხშირად გამოიყენება ორქრონიკულ სარკეებში და ემისიის ფილტრებში. გრძელგამტარი ფილტრები უნდა იქნას გამოყენებული, როდესაც აპლიკაცია საჭიროებს ემისიის მაქსიმალურ შეგროვებას და როდესაც სპექტრული დისკრიმინაცია არ არის სასურველი ან აუცილებელი, რაც, როგორც წესი, ეხება ზონდებს, რომლებიც წარმოქმნიან ერთ გამოსხივებულ სახეობას ნიმუშებში, ფონური ავტოფლუორესცენციის შედარებით დაბალი დონეებით.
ზოლიანი გამშვები ფილტრები გადასცემს მხოლოდ ტალღის სიგრძის ზოლს და ბლოკავს სხვებს. ისინი ამცირებენ ურთიერთდაკავშირებას ფლუოროფორის ემისიის სპექტრის მხოლოდ უძლიერესი ნაწილის გადაცემის საშუალებას, ამცირებენ ავტოფლუორესცენციის ხმაურს და ამით აუმჯობესებენ სიგნალ-ხმაურს თანაფარდობას მაღალი ფონური ავტოფლუორესცენციის ნიმუშებში, რასაც გრძელგამტარი ფილტრები ვერ გვთავაზობენ.
რამდენი ტიპის ფლუორესცენციული ფილტრის კომპლექტის მიწოდება შეუძლია BestScope-ს?
ფილტრების ზოგიერთი გავრცელებული ტიპია ლურჯი, მწვანე და ულტრაიისფერი ფილტრები. როგორც ნაჩვენებია ცხრილში.
| ფილტრების ნაკრები | აგზნების ფილტრი | დიქრონიკული სარკე | ბარიერული ფილტრი | LED ნათურის ტალღის სიგრძე | განაცხადი |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485 ნმ | ·FITC: ფლუორესცენტური ანტისხეულების მეთოდი · ფორთოხლის მჟავა: დნმ, რნმ · აურამინი: ტუბერკულოზის ბაცილი ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535 ნმ | · როდამინი, TRITC: ფლუორესცენტური ანტისხეულების მეთოდი ·პროპიდიუმის იოდიდი: დნმ · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365 ნმ | · ავტოფლუორესცენტული დაკვირვება ·DAPI: დნმ შეღებვა · Hoechest 332528, 33342: გამოიყენება ქრომოსომის შეღებვისთვის |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405 ნმ | · კატექოლამინები ·5-ჰიდროქსი ტრიპტამინი ·ტეტრაციკლინი: ჩონჩხი, კბილები |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640 ნმ | ·Cy5 · Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
ფილტრების კომპლექტები, რომლებიც გამოიყენება ფლუორესცენციის შეძენისას, შექმნილია ფლუორესცენციის აპლიკაციებში გამოყენებული ძირითადი ტალღის სიგრძის გარშემო, რომელიც დაფუძნებულია ყველაზე ხშირად გამოყენებულ ფლუოროფორებზე. ამ მიზეზით, მათ ასევე დაარქვეს იმ ფტორფორის მიხედვით, რომელიც განკუთვნილია გამოსახულების მისაღებად, როგორიცაა DAPI (ლურჯი), FITC (მწვანე) ან TRITC (წითელი) ფილტრის კუბურები.
| ფილტრების ნაკრები | აგზნების ფილტრი | დიქრონიკული სარკე | ბარიერული ფილტრი | LED ნათურის ტალღის სიგრძე |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485 ნმ |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365 ნმ |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535 ნმ |
| FL-აურამინი | BP470 | DM480 | BA485 | 450 ნმ |
| ტეხასის წითელი | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560 ნმ |
| მჩერი | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560 ნმ |
როგორ ირჩევთ ფლუორესცენტულ ფილტრს?
1. ფლუორესცენციული ფილტრის არჩევის პრინციპი არის ის, რომ ფლუორესცენციის/ემისიის შუქმა მაქსიმალურად გაიაროს გამოსახულების ბოლოში და ერთდროულად მთლიანად დაბლოკოს აგზნების შუქი, რათა მივიღოთ სიგნალი-ხმაურის უმაღლესი თანაფარდობა. განსაკუთრებით მულტიფოტონური აგზნების და მთლიანი შიდა ასახვის მიკროსკოპის გამოყენებისთვის, სუსტი ხმაური ასევე გამოიწვევს დიდ ჩარევას გამოსახულების ეფექტში, ამიტომ სიგნალისა და ხმაურის თანაფარდობის მოთხოვნა უფრო მაღალია.
2. იცოდე ფტორფორის აგზნების და ემისიის სპექტრი. ფლუორესცენტური ფილტრის ნაკრების შესაქმნელად, რომელიც გამოიმუშავებს მაღალი ხარისხის, მაღალი კონტრასტის გამოსახულებას შავი ფონით, აგზნების და ემისიის ფილტრებმა უნდა მიაღწიონ მაღალ გადაცემას მინიმალური გამშვები ზოლის ტალღებით იმ რეგიონებზე, რომლებიც შეესაბამება ფლუოროფორის აგზნების პიკებს ან ემისიებს.
3. გაითვალისწინეთ ფლუორესცენტული ფილტრების გამძლეობა. ეს ფილტრები უნდა იყოს გაუმტარი ინტენსიური სინათლის წყაროებისთვის, რომლებიც წარმოქმნიან ულტრაიისფერ (UV) შუქს, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს "დაწვა", განსაკუთრებით აგზნების ფილტრის, რადგან ის ექვემდებარება განათების წყაროს სრულ ინტენსივობას.
სხვადასხვა ფლუორესცენტური ნიმუშის სურათები
რესურსები გროვდება და ორგანიზებულია ინტერნეტში და გამოიყენება მხოლოდ სწავლისა და კომუნიკაციისთვის. თუ რაიმე დარღვევაა, გთხოვთ დაგვიკავშირდეთ წასაშლელად.
გამოქვეყნების დრო: დეკ-09-2022